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HPLC (bases et développement de méthodes)

Description

 


Au terme de la formation, les apprenants auront les compétences nécessaires théoriques et pratiques pour utiliser l’HPLC. Il auront réalisé des injections de mélanges standards de chromatographie en faisant varier soit le débit, soit la composition de la phase mobile. Les différents éléments de l’équipement seront parcourus du dégazeur aux détecteurs. Une approche de résolution de problèmes techniques (Troubleshouting) sera présentée. Le parcours de formation permettra également de développer une méthode d’identification et de détection de constituants d’un échantillon donné. Cette formation complète repose sur une partie pratique importante : 70 % du temps de formation.

 

Durée:

1 jour

Public

Chercheurs, professeurs, membres académiques et demandeurs d’emploi qui souhaitent acquérir les compétences théoriques et pratiques en HPLC (High Performance Liquid Chromatography)

HPLC-bases

Objectifs de la formation

Au terme de la formation, les apprenants auront réalisés des injections de mélanges standards de chromatographie en faisant varier soit le débit, soit la composition de la phase mobile. Les différents éléments de l’équipement seront parcourus du dégazeur aux détecteurs. Une approche de résolution de problèmes techniques (Troubleshouting) sera présentée. Cette formation repose sur une partie pratique assez importante : de l’ordre de 50 % du temps de formation.

Contenu & programme

Jour 1 (Base)
1) Historique de la chromatographie
2) Ce qu’est l'HPLC
3) Comment analyser un résultat en terme de sélectivité, résolution, capacité, …
4) Détermination pratique d’une courbe de Van Deemter
5) Qualité de l’injection
6) Simulation théorique d’un chromatogramme
 
Jours 2 & 3 (Base et perfectionnement)
1) les différents composants d’une chaîne de chromatographie HPLC
a) L'éluant
b) Les pompes, leur principe et leur entretien, la régulation du débit.
c) Le générateur de gradient d'élution (basse pression et haute pression)
d) Les systèmes d'injection
e) Les colonnes, technologie des  colonnes et types de phases utilisées
f) Les détecteurs : indice de réfraction, UV fixe ou à barrettes de diodes
g) Acquisition du signal, lecture du chromatogramme et obtention des résultats de l'analyse
 
2) Analyse qualitative
3) L'analyse quantitative

a) Méthode manuelle de mesure de l'aire d'un pic, méthode utilisée par un software d'intégration pour mesurer l'aire d'un pic – les paramètres à ajuster
b) Détermination du cœfficient de proportionnalité
c) Méthode absolue et ses restrictions
d) Normalisation interne, normalisation interne corrigée
e) La méthode des ajouts dosés
f) La méthode de standardisation interne

Méthode pédagogique

50 % théorie / 50 % pratique

Pré-requis

Pas de pré-requis

HPLC développement de méthodes

Objectifs de la formation

Développer une méthode d’identification et de détection de constituants d’un échantillon donné. Le module, entièrement pratique devrait amener le stagiaire à passer les différentes étapes du développement d’une méthode en revue.
Aux termes des deux jours, les stagiaires devraient avoir identifié et quantifié les composants de l’échantillon reçu. De plus ils auront rédigé et présenté la méthode développée.

Contenu & programme

Durant les deux jours, les stagiaires devront :

- Les stagiaires seront répartis en 3 groupes
- Chaque groupe recevra 1 à 2 MIX dans le(s)quel(s)
- Ils devront identifier et quantifier au moins une molécule pour laquelle ils auront reçu un minimum de documentation
- Ils recevront des standards des molécules à identifier (pour identification et quantification)
- Ils devront :
 
§         choisir un équipement (1 des 3 chaines et importance de la détection) ;
§         choisir une ou des colonnes parmi une liste disponible
§         choisir et adapter la(les) phases mobiles
§         choisir les conditions optimales de détection
§         identifier et quantifier la(les) molécules
§         faire un rapport comportant la méthode développée et les résultats obtenus
          faire une présentation (15’) aux autres stagiaires

Méthode pédagogique


20 % Théorie / 80 % Travaux pratiques

Equipement didactique :
 
Chromatographes HPLC équipés de détecteurs UV/visibles (UV et DAD), indice de réfraction (RI), fluorescence et conductivité.
 
-          3 chaines HPLC seront à la disposition des stagiaires
 
o        Pompe ternaire + Détecteur UV
o        Pompe binaire + Détecteurs DAD et RI
o        Pompe quaternaire + Détecteurs UV, Conductivité et fluorescence.
 
Choix de colonnes et de phases mobiles.
 Standards mis à disposition.

Pré-requis

Bases de l'HPLC